La respiration chez les levures

La respiration chez les levures et la photosynthèse chez la chlorelle





Matériel
nécessaire :


·
Capteurs : sonde
oxymétrique


·
Bioréacteur et agitateur
magnétique (ou boite de pellicule photo)


·
Interface et ordinateur


·
Un bain marie réglé à
30°C,


·
Une suspension de levures
(10 g.l^-1 dans l'eau ou tampon phosphate pH= 7,2),


·
Une solution de glucose à
100 mg.l^-1 (0,55 mmol.L^-1).


·
Une solution de glucose à
200 mg.1^-1 (1.1 mmol.l^-1).





Préparation de
la suspension de levures :


·
Prendre 10 g.l^-1
dans le cas de levures fraîches et 2,5 g.l^-1 dans le cas de levures
lyophilisées.


Attention : Toutes les souches du commerce
ne se valent pas pour étudier la respiration. Certaines souches sont
volontairement déficientes respiratoire afin de favoriser la fermentation.


·
Dilué les levures dans 1 L
de tampon phosphate.


·
Mettre en agitation douce
et sous aération (bulleur aquarium) durant au moins 24 heures.





Manipulation :


·
Orphy expert


F
Ouvrir thème F Respiration


F cellulaire levure
(oxymétrie)


F
poursuivre.


·
Placer le bioréacteur dans
un cristallisoir contenant de l’eau (30°C).


·
Verser 6 à 7 mL de
suspension de levures dans le bioréacteur, puis le barreau magnétique.


·
Placer la sonde oxymétrique
en prenant soin de ne pas coincer de bulle d’air sous la sonde.


·
Lancer une agitation la
plus douce possible.


·
Attendre 1 minute la
stabilisation du système.


Attention : Votre suspension de levures
doit être bien oxygénée au départ sous peine de voir s’afficher des valeurs
trop faibles de concentration en O₂ au lancement des mesures.


·
Lancer les mesures :


F
Au temps To + 1 minute,
ajouter 0,5 mL d’une solution de glucose 100 mg.l^-1.


F
Attendre la fin des
mesures.





·
Rincer soigneusement le
bioréacteur et placer à nouveau 6 à 7 mL d’une suspension de levures.


·
Placer la sonde et lancer
une agitation la plus douce possible.


·
Caler la sonde sur la
valeur initiale de concentration en O₂ lors des premières mesures.


F
Etalonnage


F
Oxymètre


F
Calage


F
Rentrer la valeur


F
Caler maintenant


F
Terminer.


·
Lancer les mesures :


F
Au temps To + 1 minute,
ajouter 0,5 mL d’une solution de glucose 200 mg.l^-1.


F
Attendre la fin des
mesures.


·
Enregistrer les résultats.


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FICHE
TECHNIQUE

RESPIRATION ET FERMENTATION CHEZ
LA LEVURE


Protocole respiration

1. 
   Placer 4.5 mL de tampon dans la cuve de mesure.
   
2. 
   Prélever 0.5 mL de suspension de levures et les ajouter dans la
   cuve.
   
3. 
   Agiter énergiquement la cuve pour saturer le milieu en oxygène
   moléculaire.
   
4. 
   Étalonner la sonde à oxygène.
   
5. 
   Paramétrer l'acquisition pour une mesure de 3 minutes sur la voie
   EA2.
   
6. 
   Démarrer l'acquisition et après 30 secondes, injecter lentement
   0.2 mL de solution de glucose.
   
7. 
   Sauver les résultats et imprimer le graphique.
   

Protocole fermentation

1. 
   Paramétrer l’acquisition pour une mesure de 15 min sur la voie EA0.
   
2. 
   Placer 8 mL de la suspension de levures non diluée dans le flacon
   de mesure.
   
3. 
   Ajouter 4 mL de solution de glucose et agiter légèrement
   pour mélanger.
   
4. 
   Mettre en place le capteur sur le flacon et placer ce dernier au bain-marie.
   
5. 
   Déclencher la mesure.
   
6. 
   Sauver les résultats et imprimer le graphique.
   

Numération des cellules
Pendant les temps d'acquisition, prélever 10 µL de la suspension
mère de levures, la diluer au 1/100 et introduire une goutte de
la dilution dans une cellule de numération.

Compter les cellules dans un carré de la grille.

Multiplier le résultat par 90 pour obtenir le nombre de cellules
par µL.

Multiplier le nombre obtenu par 100 pour tenir compte de la dilution
réalisée : la valeur finale est le nombre de cellules par
µL dans la suspension mère.

En déduire le nombre de cellules présentes respectivement
dans les cuves utilisées pour les mesures de fermentation et de
respiration.

Conserver les résultats pour la prochaine séance.

merci

merci

merci mes amis

le lien ne marche pas